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《第二军医大学》 2007年
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中药注射剂的化学物质基础与全程质量控制研究

娄子洋  
【摘要】: 本论文以注射用双参为研究对象,针对当前注射剂质量控制方面存在的问题,从化学成分入手,以注射用双参中两味药材所含生物活性成分为分析对象,通过对其前处理条件的系统研究,确定了丹参与人参两味药材、中间体和注射剂中多种化学成分的最佳提取方法。利用高效液相色谱法对两味药材中化学成分进行了快速分离和分析,通过对色谱条件的优化,确定了最佳的液相分离分析条件。结合高分辨飞行时间质谱对两味药材中所含的主要化学成分进行了定性分析,利用离子阱质谱初步解释了各类主要成分的质谱碎裂规律。在对两味药材中化学成分进行定性鉴别与结构解析的基础上,确定各色谱峰所代表的化学物质,制作中药材、中间体与注射剂的指纹图谱,从而达到对中药注射剂的有效控制。本文主要分以下两大部分: 第一部分注射用双参及相关药材中化学成分的定性鉴别与分析 实验中分别对丹参与人参药材的提取条件进行了系统优化,对于丹参以已有的七个对照品为指标,考察了影响丹参药材提取效率的各个因素,包括提取方法,提取时间,提取溶剂,提取次数等,最终确定采用70%的甲醇提取。人参通过比较各提取方法,最终采用药典方法提取人参中人参皂苷类成分。然后对其液相条件进行系统考察优化以确定最佳的分析检测条件,使各色谱峰都达到较好的分离。HPLC-DAD色谱图显示丹参药材色谱图中,共有40个明显的色谱峰被分离,人参药材色谱中有42个明显的色谱峰被检测到;借助高分辨飞行时间质谱仪对各化学物质质核比的精确分辨能力,得到丹参中40个成分和人参中42个成分的精确分子量,对其化学成分进行了初步定性。然后利用离子阱技术对各同分异构体进行多级裂解分析,确定各化学成分的结构式。结果显示丹参的主要特征性成分为酚酸类和二萜醌类成分。其中酚酸类成分极性较大,在色谱图上首先出峰,集中在0~18min,而二萜醌类成分极性较小,在色谱图上后出峰,保留时间集中在18~30min。人参的主要特征性成分为人参皂苷。丹参的两类成分在离子阱上分别显示出不同的裂解规律。丹参中酚酸类成分呈现单体、二聚体或多聚体等,大多数酚酸类成分为丹参素,咖啡酸单体的聚合物,所以其裂解图谱时显示出信号较强的的去丹参素、咖啡酸的碎片离子;二萜醌类成分的基本结构母核相同,因此在其多级裂解图谱上,具有共同的碎片裂解特点,如均易失去15,28,44,形成去甲基,羰基,羧基的碎片离子。人参中主要特征性成分为人参皂苷类,据文献报道人参中人参皂苷主要分为以下几种:原人参二醇型,原人参三醇型和齐墩果烷型。三种人参皂苷在离子阱上显示出各自明显的裂解规律。负离子模式下,易形成分子离子,较少形成碎片离子;正离子模式下,三种人参皂苷显示出各自特征性的碎片离子,如原人参二醇型具有m/z 443,425,407的碎片离子,其中407的碎片离子信号最强;原人参三醇型具有m/z 441,423,405的碎片离子;齐墩果烷型显示出m/z 439的碎片离子。在对两味药材中各化学成分的系统研究的基础上,分别对其药材、中间体和制剂进行化学成分归类定性,并结合其临床应用和药理学研究结果,确定其各个色谱峰所代表的化学物质,为指纹图谱的制作提供可靠依据。为采用质谱法对中药材、中间体及注射剂中各化学成分进行定性鉴别和质量控制的实际应用提供了有价值的参考。 第二部分注射用双参药材、中间体、制剂的指纹图谱研究 在对药材、中间体、制剂分别进行了定性鉴别和结构确证的基础上,对色谱图中各共有峰进行成分明确化分析。在对中药材、中间体和注射剂中各化学成分进行定性鉴别和系统研究的基础上,利用HPLC-DAD, HPLC-TOF-MS, HPLC-MS~n三种分离分析技术,以HPLC-DAD为主,HPLC-TOF-MS, HPLC-MS~n为辅,HPLC-TOF-MS,HPLC-MS~n二种技术用于各成分的定性鉴别,确定其共有峰所代表的化学物质,以HPLC-DAD为主,制作指纹图谱。利用HPLC分别建立了丹参与人参药材不同批次的指纹图谱,中间体与注射剂不同批次的指纹图谱,为中药注射剂的指纹图谱研究与全程质量控制提供示范性的研究工作。
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R284

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