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《贵州师范大学》 2017年
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小一点红药材质量控制与抗炎谱效关系研究

蒋政萌  
【摘要】:小一点红为菊科(Asteraceae)一点红属(Emilia)植物小一点红(Emilia prenanthoides DC.)的干燥全草,在贵州黔南、黔东南地区具有悠久的药用历史。具有清热解毒,活血化瘀之功效,主治跌打损伤,红白痢,疮疡肿毒。《中华本草》、《中国植物志》、《贵州植物志》、《广州植物志》、《福建植物志》等本草书籍中均有记载,并拟收载于2013年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》。第一部分小一点红药材的化学成分辨识与多指标性成分含量测定基于同属植物一点红的化学成分研究,查阅相关文献并结合课题组前期对于一点红化学成分研究成果。本课题采用HPLC,比对化合物对照品与样品的保留时间与紫外吸收光谱鉴定小一点红药材中的化学成分,结合UPLC-ESI-MS/MS得出的总离子流图,比对化合物对照品与样品的相对分子质量和离子碎片进行佐证。从小一点红药材中首次指认出绿原酸、新西兰牡荆苷、金丝桃苷、槲皮苷、异槲皮苷和原儿茶酸7个化合物。针对以上7个化合物,建立了HPLC-DAD同时测定小一点红中7种化合物的分析方法,并对黔产12批药材中7种化合物进行测定。结果表明:该方法准确、可靠、简便易行可用于贵州省不同产地小一点红药材中7种化学成分的测定。第二部分小一点红药材指纹图谱研究初步建立了黔产小一点红药材指纹图谱测定条件,结果分析以槲皮苷为参考峰,筛选出14个共有特征峰,并对其中6个色谱峰进行了指认,分别为绿原酸、新西兰牡荆苷、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮苷。相似度结果表明12批不同产地小一点红药材的相似度有8批大于0.9。并利用SPSS软件进行聚类分析,分析结果表明产地相近的药材基本划归为一类,且小一点红的质量与其生长环境、采收季节和贮藏条件可能有较大关联性;进行了主成分分析,分析结果表明,14个共有峰中取3个主成分时其方差总贡献率为91.30%,且A2、A3(绿原酸)、A4、A9(芦丁)、A13、A14(槲皮苷)是影响各批次小一点红质量的主要成分。第三部分小一点红药材抗炎谱效关系研究采用二甲苯致小鼠耳肿胀法和角叉菜胶致大鼠足肿胀法,通过设高、中、低三个剂量组比较肿胀度与抑制率进行抗炎活性研究,实验结果表明,小一点红药材具有明显的抗炎作用;并针对8批差异性较大的药材,采用角叉菜胶致小鼠足肿胀法,以足肿胀度、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)浓度为药效评价指标,比较不同产地小一点红药材的抗炎活性,结果表明:模型组与空白组比较所监测的各药效指标之间均有显著性差异(P0.05),表示建模成功;各给药组与模型组比较所监测的药效指标之间有显著性差异(P0.05),表明不同产地的小一点红样品均具有抗炎作用;且不同产地的各药效指标也存在差异,表明不同产地的小一点红药材抗炎效果存在差异。依据小一点红药材的抗炎活性研究结果并结合指纹图谱数据,采用灰关联度分析法、偏最小二乘回归分析法和人工神经网络算法,进行谱效关系初探。灰关联度分析结果显示:小一点红指纹图谱14个共有峰与小一点红抗炎活性关联度大小顺序为:A3A1A14A4A13A11A9A10A6A8A12A2A5A7;偏最小二乘法结果显示:一点红指纹图谱14个共有峰中与小一点红抗炎活性5个药效指标关联度较大的色谱峰为A3(绿原酸)、A14(槲皮苷)、A4、A9(芦丁)和A13;人工神经网络算法也显示出相似的结果。综合分析3中数理统计分析结果,得出小一点红药材指纹图谱中14个共有峰中与其发挥抗炎活性关联度较大的色谱峰有A3(绿原酸)、A14(槲皮苷)、A4、A9(芦丁)和A13。证明小一点红药材发挥抗炎作用的药效物质可能是以上几个化合物,为制定科学、规范、合理的质量标准提供了科学支撑。第四部分小一点红药材质量标准研究按2015年版《中国药典》通则项下规定方法对小一点红药材进行性状水分、浸出物、灰分、农药残留和重金属等限量研究;以槲皮苷和绿原酸为对照品制定了小一点红药材的薄层色谱鉴别方法,斑点清晰,分离度好;并以槲皮苷为指标性成分,建立了简便快捷,专属性强,线性、重复性、精密度和回收率良好,可应用于小一点红的质量控制的量测定方法;初步拟定了小一点红药材的质量标准草案。另外建立了以芦丁为对照品,用于测定小一点红药材中总黄酮含量的紫外分光光度法,各批次药材中总黄酮含量在23.16~56.52 mg·g~(-1)之间,且利用响应面法优化了小一点红总黄酮的超声提取工艺,得到的提取工艺对小一点红中总黄酮的提取率为77.96%。
【学位授予单位】:贵州师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R284.1;O657

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