收藏本站
《成都中医药大学》 2014年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于细胞响应谱的中药注射剂质量评控方法研究

马丽娜  
【摘要】:中药注射剂不良反应时有发生,提高其质量评控水平对保障其临床用药安全具有重要意义。目前中药注射剂不良反应的发生主要以过敏反应为主,其中类过敏反应约占70-80%。而肥大细胞脱颗粒是类过敏反应关键的效应环节,因此,关注这一效应环节是提高中药注射剂质量评控水平的突破口。然而,现有的电镜观察等脱颗粒检测方法,虽可直接观察某一时相形态学变化,但需化学固定、显色处理,操作繁琐。而具有指纹特性的细胞响应谱方法,可实时在线、无标记地表征药物和细胞相互作用的过程信息。 因此,本课题在注射剂常规制剂通则检查和化学指纹谱表征基础上,以注射用双黄连冻干为模式药,建立基于细胞响应谱的常规-化学-生物联合检测的中药注射剂质量评控新方法。在此基础上,进一步关注目前中药注射剂安全性评价中备受争议的绿原酸,从其结构不稳定的特点入手,探讨绿原酸类成分致肥大细胞脱颗粒效应,以期为中药注射剂质量评控与不良反应早期预警提供参考,最大限度地减少不良反应事件发生,保障临床用药安全。主要研究结果如下: 1建立了基于肥大细胞脱颗粒效应的细胞响应谱方法 依据活细胞具有电阻抗生物传感属性的原理,以Compound48/80(C48/80)为模式药,RBL-2H3细胞为模式生物,以细胞指数CI、半数抑制浓度ECso和抑制率I为评价指标,采用实时在线分析技术动态监测不同浓度C48/80对RBL-2H3细胞脱颗粒效应情况,结果在10-50μg·mL-1浓度(C)范围内,C48/80致RBL-2H3细胞的脱颗粒效应具有明显的量效和时效关系,抑制率回归方程为I=0.0193C-0.048(r0.99), EC50为33.45μg·mL-1。同时辅以常规体外方法(如细胞形态学观察、流式脱颗粒率检测、过敏介质因子检测等)和体内伊文思蓝染色及β-氨基己糖苷酶释放率检测法验证,结果表明以细胞指数-作用时间曲线表征的细胞动态响应谱可灵敏地反映模式药对RBL-2H3细胞影响的动态特征信息,与传统方法相比,该方法具有操作简便、高通量、实时在线等优势,为中药注射剂的质量评控提供了技术支持。 2初步阐明了绿原酸类成分致肥大细胞脱颗粒的效应情况 采用活细胞响应谱技术、细胞形态学观察、常规药理实验和过敏介质检测实验,以Compound48/80为阳性药,RBL-2H3细胞为模式生物,评价了10种绿原酸类成分(咖啡酸、奎尼酸、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,3-二咖啡酸奎尼酸、1,5-二咖啡酸奎尼酸)的脱颗粒效应,结果其ECso分别为294.19±36.51,2411.60±16.8,612.76±29.40,171.71±23.32,80.25±2.60,917.53±33.50,913.01±32.20,919.73±35.60,920.51±34.65,916.75±31.98μg/mL,脱颗粒效应的强弱顺序为:隐绿原酸新绿原酸咖啡酸绿原酸异绿原酸B1,5-二咖啡酸奎尼酸异绿原酸A异绿原酸C1,3-二咖啡酸奎尼酸奎尼酸。进一步采用液质联用技术对绿原酸的体内、体外转化规律研究,结果表明绿原酸可能转化为脱颗粒效应更强的隐绿原酸、新绿原酸和咖啡酸等物质,这一发现将为绿原酸致敏性的研究提供新线索。 为进一步研究绿原酸类成分在中药注射剂中的致敏情况,采用“敲出敲入”策略,通过比较敲出阳性组分(隐绿原酸、新绿原酸、咖啡酸、绿原酸)及其阴性组分和注射剂整体的脱颗粒效应,发现隐绿原酸、新绿原酸、咖啡酸对中药注射剂整体的脱颗粒效应强度具有一定的贡献,而且与注射剂中的其他成分具有协同增效情况,表明引发注射用双黄连(冻干)不良反应的原因不仅仅是绿原酸类成分。同时将隐绿原酸、新绿原酸、咖啡酸按照自然配比,逐渐递增敲入阴性样品中,发现在本实验条件下3种成分对注射剂整体的脱颗粒效应具有一定的剂量依赖关系。 3初步建立了基于细胞响应谱的的注射用双黄连(冻干)质量一致性评价方法 以注射用双黄连(冻干)为模式药,采用新建立的细胞响应谱方法,建立基于生物评价的中药注射剂质控新方法。采集、制备注射用双黄连(冻干)样品共30批,其中正规合格样品5批,不合格样品25批(高温加速样品、光照加速样品、开放环境放置样品、过期样品及不良反应样品)。通过中药注射剂常规制剂通则、化学指纹图谱和活细胞响应谱3种不同检查方法,对不同批次样品进行检查,结果常规制剂通则检查可区分出6批不合格样品,化学指纹图谱可区分出9批不合格样品,而活细胞响应方法则可区分出21批不合格样品,3种方法联合检查则可分别检出25批不合格样品中的批11(常规+化学)、22批(常规+生物)、22批(化学+生物)、23批(常规+化学+生物),检出率分别为44%、88%、88%、92%,表明所建细胞响应谱评价方法可较大地提高现有方法(常规+化学)检出效率。提示该技术可作为现行中药注射剂质量控制方法的有益补充,用于注射用双黄连(冻干)及其它中药注射剂的质量一致性检测与不良反应预警。 综上所述,本研究建立的具有实时在线特点的细胞响应谱方法,作为注射剂制剂通则检查和化学指纹谱方法的有益补充,可直接关联注射剂生物活性,从而更有效反映中药注射剂质量一致性、稳定性;此外,初步阐明了绿原酸类成分致肥大细胞脱颗粒效应的作用特点,为提高中药注射剂的质量评控水平,减少中药注射剂不良反应事件的发生,提供了新的研究思路和技术支持。
【学位授予单位】:成都中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R285

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王世端;;围手术期药物过敏反应[J];青岛大学医学院学报;2009年02期
2 陈玉琼;张萃;;中药类过敏反应研究进展[J];广东药学院学报;2013年04期
3 罗飞;包旭;林大胜;杨华蓉;周莎;徐小平;;绿原酸对动物的致敏性研究[J];华西药学杂志;2009年02期
4 丁玉峰;;中药注射剂引起的变态反应及其影响因素[J];华中医学杂志;2007年04期
5 何洲;屈会化;王雪茜;赵琰;李翼飞;胡丽娜;卢建秋;王庆国;;绿原酸作为半抗原的致敏性研究[J];北京中医药大学学报;2010年10期
6 肖小河;;中医药转化医学中的关键科学问题:中药质量生物评价与控制[J];中药与临床;2010年04期
7 杨国秀;张同星;彭国平;;清热解毒类清开灵注射液中热原检测方法的比较[J];中药与临床;2011年02期
8 储雪蓉;储雪雁;汤迎爽;;4种中药注射液与输液配伍前后不溶性微粒及pH值变化的分析[J];中医药导报;2014年01期
9 郭薇,陈玉川,刘水平,王曙光,孔庆瑜;一种定量检测肥大细胞脱颗粒的新方法[J];上海免疫学杂志;2002年01期
10 张嘉;李澎;李贻奎;李连达;;吐温80诱导RBL-2H3细胞脱颗粒作用研究[J];现代免疫学;2009年03期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 张倩;基于生物热动力学表达的中药注射剂质量评价模式与方法的初步研究[D];成都中医药大学;2009年
2 牟晓洲;基于微电子阻抗技术实时监测细菌与细胞相互作用方法的建立和应用[D];浙江大学;2011年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周光树;李贞;;中药注射剂不良反应原因分析与预防[J];中医药临床杂志;2009年02期
2 吴庆侠;董海龙;芮亚培;;牦牛子宫内膜腺上皮细胞分离培养方法比较[J];安徽农业科学;2011年18期
3 王训;韩永升;韩咏竹;胡纪源;李凯;喻绪恩;杨任民;杨斌;;成肌细胞移植治疗DMD模型-mdx鼠骨骼肌Dystrophin表达的实验研究[J];安徽医学;2009年02期
4 程民;;我市666例药品不良反应报告分析[J];安徽医药;2007年05期
5 赵斌;葛金芳;朱娟娟;黄晓晖;李俊;;小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC_(50)的计算方法[J];安徽医药;2007年09期
6 赵向阳;;761例中药不良反应报告分析[J];安徽医药;2007年10期
7 何勇;;中药注射剂不良反应的原因与对策分析[J];安徽医药;2008年06期
8 袁孔现;胡文兵;李国忠;;中药注射剂不良反应原因探讨及对策[J];安徽医药;2008年09期
9 董宪法;杨之煜;洪向东;陆慧晶;李峰;范鲁雁;娄彦敏;王金亮;张文;汪柳松;;154例中药注射剂不良反应报告分析[J];安徽医药;2008年10期
10 王利;王艳;;浅议如何提高中药注射剂的安全性[J];安徽医药;2008年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈莉婧;汪艳;贺帅;廖国平;张忠义;;清开灵注射液对RBL-2H3细胞脱颗粒影响的研究[A];2010年广东省药师周大会论文集[C];2011年
2 易艳;梁爱华;赵雍;李春英;王海林;刘婷;曹春雨;郝然;高双荣;回连强;;注射用双黄连类过敏反应物质及作用机制研究[A];低碳生活与健康损害论坛——中国环境诱变剂学会风险评价专业委员会全国第十三届学术会议暨第四届第5次委员会会议论文集[C];2011年
3 陆叶;喻小勇;李明;;264例脉络宁注射液不良反应分析[A];2010年江苏省药学大会暨第十届江苏省药师周大会论文集[C];2010年
4 韩茹;杨晶凡;张春晖;;中药注射剂的ADR分析与临床再评价研究[A];第一届全国中药商品学术大会论文集[C];2008年
5 杨思芸;王龙飞;李胜前;李林;曾友志;;415例药品不良反应报告分析[A];四川省药学会第七次全省会员代表大会暨学术年会论文集[C];2011年
6 王丽霞;;注射剂附加剂及其安全性[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
7 徐国良;张卓辉;张增珠;张启云;;双黄连注射剂过敏症动物模型的实验研究[A];第九届全国中药和天然药物学术研讨会大会报告及论文集[C];2007年
8 刘燕娟;金国强;郝建峰;;怎样预防中药注射剂的不良反应[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
9 于江泳;王晓刚;;应用HACCP原理建立中药注射剂综合标准化质量控制体系[A];2009年中国药学会药事管理专业委员会年会暨“国家药物政策与《药品管理法》修订研究”论坛论文文集[C];2009年
10 杨桂生;;中药注射剂不良反应的成因与防治[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 贺常亮;治疗鸡大肠杆菌病的中药方剂筛选及其作用机理研究[D];吉林大学;2011年
2 孙伟伟;鱼腥草注射液增溶剂的优选研究[D];北京中医药大学;2011年
3 丁国武;黄河兰州段环境激素污染水平及有机污染物的细胞毒性研究[D];兰州大学;2011年
4 叶莹;基于数据挖掘技术的痰、饮辨证论治规律的比较研究[D];成都中医药大学;2011年
5 周玥;人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老的机理研究[D];重庆医科大学;2011年
6 田晓峰;Caveolin-1在鼠视网膜新生血管形成中调控作用的研究[D];中南大学;2011年
7 刘平;三甲氧基二苯乙烯及其对非小细胞肺癌A549细胞的抗肿瘤作用及分子机制研究[D];中南大学;2010年
8 郭丽丽;瘢痕疙瘩成纤维细胞核转录因子-kB信号通路及其与锌指蛋白A20相关性研究[D];郑州大学;2010年
9 郭姗姗;适合评价中药注射液过敏反应的动物模型研究[D];中国中医科学院;2011年
10 曲婷婷;活血行气方药物血清对人胃癌SGC-7901细胞株作用的实验研究[D];辽宁中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 段超;靶向大鼠血管平滑肌细胞STAT3的慢病毒干扰载体的构建及其效果鉴定的研究[D];南京医科大学;2010年
2 刘子青;MGF对肌卫星细胞增殖及Akt蛋白表达的影响[D];上海体育学院;2010年
3 徐蕊;氟对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素B的影响[D];郑州大学;2010年
4 李铭花;三种传统配伍中药抗氧化特性的研究[D];山东农业大学;2010年
5 刘宝峰;盐酸阿霉素脂质体注射液有效性和安全性研究[D];山东大学;2010年
6 吴玮玮;县级医疗机构临床用药风险防范研究[D];成都中医药大学;2010年
7 董鹏飞;羧甲基壳聚糖钙体外细胞毒性实验研究[D];滨州医学院;2010年
8 张鹤琼;酸性成纤维细胞生长因子对顺铂诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用研究[D];广西医科大学;2011年
9 徐雅玲;白花丹素诱导体外大鼠肝细胞损伤及改构型酸性成纤维细胞生长因子对其保护作用的实验研究[D];广西医科大学;2011年
10 李烨;洛铂对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞体外增殖抑制和诱导凋亡的实验研究[D];广西医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王鸿根;浅谈中草药的过敏反应与毒性反应[J];中医药临床杂志;2004年06期
2 蒋雪嫣;复方丹参注射液与45种药物配伍的稳定性考察[J];中医药临床杂志;2005年05期
3 王萍;汪丽燕;;山栀对胆囊收缩的实验研究[J];安徽医学;1993年06期
4 王利;王艳;;浅议如何提高中药注射剂的安全性[J];安徽医药;2008年11期
5 杨芳;;黄芪注射液不良反应31例分析[J];浙江中医药大学学报;2010年05期
6 傅诚杰,俞婷,缪炜,沈韫芬;四膜虫:毒理学与生态毒理学研究中的优良模式生物[J];动物学杂志;2005年01期
7 丁友芳;闫林林;王彩云;Neo C.Mokgolodi;史玲玲;刘玉军;;不同产地紫苏叶HPLC指纹图谱研究[J];北京林业大学学报;2011年06期
8 田庆才,李晓红,毕艳;凝血因子制品中Tween-80残留量测定方法的对比分析[J];中国输血杂志;2005年04期
9 陈又平;用传统催化剂提高失水山梨醇单油酸酯的质量[J];表面活性剂工业;2000年01期
10 王宏军,吴国娟,李焕荣,于同泉,蒋红,路苹;金银花中绿原酸提取方法的筛选及其抑菌作用[J];北京农学院学报;2003年04期
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 王乐民 金宽;[N];健康报;2006年
2 广州中医药大学附属中山医院 梅全喜 曾聪彦 广东省博罗先锋药业集团有限公司 何国增;[N];中国中医药报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 张治国;环氧乙烷和环氧丙烷的开环聚合反应与产物性能研究[D];浙江大学;2005年
2 严诗楷;清开灵注射液化学指纹图谱研究[D];浙江大学;2005年
3 高晓燕;清开灵注射液生产在线检测与质量评价方法研究[D];北京中医药大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 白洁;多维高效液相色谱法的建立及其在清开灵质量控制中的应用[D];北京中医药大学;2007年
2 田锋奇;黄芩苷的致过敏作用机制[D];郑州大学;2007年
3 单体兴;两种表面活性剂在海水中的光化学降解研究[D];中国海洋大学;2009年
4 刘婷;鱼腥草注射液的致敏性研究[D];中国中医科学院;2010年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王丽华,袁耀辉;中药注射剂临床应用需注意的问题[J];中国药物与临床;2005年11期
2 吴抗美;;我院中药注射剂应用分析[J];中国医院药学杂志;2005年12期
3 周超凡;林育华;徐植灵;;慎重使用中药注射剂[J];中国药物警戒;2005年04期
4 阿孜古丽 ,吐逊江 ,迪莉拜尔;中药注射剂合理使用应注意的问题[J];新疆中医药;2005年01期
5 周超凡;徐植灵;林育华;;从药物鉴别看中药注射剂[J];中国中药杂志;2006年16期
6 曹建华;;中药注射剂临床使用安全性的探讨[J];中华中医药学刊;2007年10期
7 张立平;郭彬;;中药注射剂的合理应用[J];中国民间疗法;2007年11期
8 王艳;赵丽华;;中药注射剂现状反思[J];中国医疗前沿;2007年23期
9 张军红;朱美华;张秀芹;;中药注射剂致死亡59例调查与分析[J];中外医疗;2007年19期
10 樊东升;;中药注射剂的合理应用[J];基层医学论坛;2008年S1期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 侯世祥;;已上市中药注射剂质量监控与再评价刍议[A];2009全国中药创新与研究论坛学术论文集[C];2009年
2 芦柏震;陈小娟;侯桂兰;王春雷;;对中药注射剂的认识与观点[A];全国中药注射剂安全性及产业发展交流研讨会论文集[C];2009年
3 孙文基;;对中药注射剂的实践、认识和体会[A];全国中药注射剂安全性及产业发展交流研讨会论文集[C];2009年
4 林瑞超;;中药注射剂质量控制的若干思考[A];新医药卫生改革与药学发展高峰论坛暨《中国药学杂志》第十二届编委会会议论文集[C];2009年
5 覃洁;;2004~2006年我院使用中药注射剂情况分析[A];中华中医药学会中成药学术研讨会论文集[C];2007年
6 高利;张倩;宋珏娴;;辩证使用中药注射剂[A];第五次全国中西医结合神经科学术会议论文集[C];2004年
7 吴久鸿;薛克昌;;中药注射剂的不良反应及其预防[A];第八届全国中药和天然药物学术研讨会与第五届全国药用植物和植物药学学术研讨会论文集[C];2005年
8 马涵涛;;临床合理使用中药注射剂应注意的几个问题[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
9 郭洁文;;中药注射剂的现状与发展思考——问题与美好前景并存[A];广东省药学会送学下乡地市药学人员继续教育学习班讲义[C];2007年
10 陈云;;谨慎应用中药注射剂[A];全国第七届中医药继承创新与发展研讨会文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘占滨;中药注射剂面临行业危机[N];健康报;2006年
2 余文海;中药注射剂是中西医结合的产物[N];健康报;2007年
3 薛原;逾99%医生认为中药注射剂安全有效[N];健康报;2007年
4 定义;中药注射剂发展现状及存在问题[N];健康报;2007年
5 周俏春;正确认识中药注射剂不良反应[N];农村医药报(汉);2007年
6 本报记者  魏小刚;科学对待中药注射剂[N];中国医药报;2006年
7 周超凡;新视角反思中药注射剂[N];中国医药报;2006年
8 姚震宇;中药注射剂上市后再评价不可忽视[N];医药经济报;2006年
9 卫星;中药注射剂安全和疗效获医学界肯定[N];医药经济报;2007年
10 本报记者 施嘉奇;中药注射剂 缘何屡被叫停[N];文汇报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 吴嘉瑞;基于文献数据库和传统药物警戒思想的中药注射剂安全性研究[D];北京中医药大学;2007年
2 闫位娟;中药注射剂致敏性研究[D];广西医科大学;2009年
3 张倩;基于生物热动力学表达的中药注射剂质量评价模式与方法的初步研究[D];成都中医药大学;2009年
4 马丽娜;基于细胞响应谱的中药注射剂质量评控方法研究[D];成都中医药大学;2014年
5 娄子洋;中药注射剂的化学物质基础与全程质量控制研究[D];第二军医大学;2007年
6 王建成;中药注射剂联合化疗治疗胃癌的网状Meta分析[D];兰州大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张丽芝;中药注射剂发展现状及在山东省内应用情况的调研[D];山东大学;2008年
2 郑秀利;中药注射剂技术发展初探[D];山西大学;2009年
3 张欣;医疗机构中药注射剂的合理用药情况调查分析与对策[D];山西医科大学;2010年
4 衣冉;中药注射剂安全性评价体系的研究[D];山东大学;2009年
5 辛征骏;中药注射剂不良反应监控模式的研究[D];成都中医药大学;2009年
6 蒋林英;中药注射剂质量标准相关研究[D];南京中医药大学;2008年
7 杨杰锋;中药注射剂安全性再评价管理探究及对策[D];山东大学;2012年
8 李秀明;中药注射剂安全性监管问题研究[D];南京中医药大学;2013年
9 刘白杨;中药注射剂企业的创新战略[D];首都经济贸易大学;2014年
10 张娜;基于灰色理论与关联规则的中药注射剂不良反应成因研究[D];北京中医药大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026


丁香五月 啪综合