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《成都中医药大学》 2011年
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基于成分敲出/敲入的中药(牛黄)药效物质辨识和质量控制模式的初步研究

孔维军  
【摘要】:中药质量控制一直是中药现代化研究的难点和重点,而药效物质辨识则是支撑中药质量控制的前提和基石。然而,由于中药自身的复杂性,以及研究思路、方法和技术条件的限制,绝大多数中药的药效物质基础尚不清楚。在此背景下,现行主要以指标成分的定性定量分析为主要内容的中药质量控制模式,不可避免地陷入“难关药效,量而不准,难控难评”的窘局。 为寻求解决中药药效物质辨识与质量控制问题的新突破,本文探索建立基于成分敲出/敲入的中药药效物质辨识和质量控制新模式:以成分敲出辨识中药关键药效组分(主要药效成分和/或药效相关成分)及其相互作用关系,实现质控指标“找得准,测得准”;以成分敲入确定关键药效组分的“量-效”关系,制定科学合理的药效组分含量限度范围,实现质控指标“定得准”,为实现中药质控标准“关联药效,量而又准,可控可评”的愿景提供思路和技术参考。 本文以临床常用且药效物质相对明确的人工牛黄为模式药,抗真菌(白色念珠菌Candida albicans)作用为药效模型,初步验证该模式的科学性和可行性。主要结果与结论如下: 一、牛黄及其代用品的主要成分含量波动较大,质量差异明显 采用液相色谱法对40批牛黄及其代用品进行化学分析,发现其中6种胆汁酸类成分(牛黄胆酸钠、胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸)的含量变异较大:13批天然牛黄中6种胆汁酸总含量的变异系数为62.44%~222.56%,其中熊去氧胆酸含量的变异系数最大;20批人工牛黄中6种胆汁酸总含量的变异系数为63.27%~122.73%,其中猪去氧胆酸含量的变异系数最大。该结果提示,市售牛黄及其代用品主要化学成分含量波动较大,质量差异明显,牛黄的质量控制指标和标准尚需进一步提升和优化。 二、化学-生物指纹图谱联用可有效提高对牛黄及其代用品的鉴别效果 (1)采用液相色谱法建立了天然牛黄、人工牛黄、体内培植牛黄、体外培育牛黄和伪牛黄五类样品的化学指纹图谱,相似度分析结果显示,90%样品的相似度介于0.6~0.9之间。对化学指纹图谱进行主成分分析结果显示,所有样品被区分为四组,大部分样品能根据其品种和来源被较好的区分和鉴别,但是部分天然牛黄与体外培育牛黄、人工牛黄样品之间仍有交叉。 (2)采用微量量热法测定了40批样品作用于5种生物模型(金黄色葡萄球菌、青春双歧杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和白色念珠菌)的生物热活性指纹图谱,结果显示白色念珠菌对样品最敏感,为优选的生物模型。对白色念珠菌的生物热活性指纹图谱进行主成分分析结果显示,所有样品被区分为五类,大部分样品能根据其品种和来源被较好的区分和鉴别,但是部分天然牛黄与人工牛黄和体外培育牛黄、人工牛黄与体内培植牛黄样品之间仍有交叉。 (3)联合化学指纹图谱和白色念珠菌的生物热活性指纹图谱,可将所有样品分为五组,其中38批样品能被有效区分和鉴别,只有2批人工牛黄与伪品交叉,不能被鉴别。该结果提示,通过化学-生物指纹图谱联用对40批牛黄及其代用品的鉴别效果明显高于分别通过化学指纹图谱和生物热活性指纹图谱对样品的鉴别效果。以上结果表明,化学-生物指纹图谱联合分析,可显著提高对牛黄及其代用品的鉴别效果,在牛黄等名贵珍稀中药材的真伪鉴定等方面具有较好的应用前景。 三、通过敲出策略,初步实现人工牛黄抗真菌关键药效物质的快速辨识 1.薄层层析法分离人工牛黄样品,得到8个目标敲出组分(记为X+)分别为:A+(牛黄胆酸钠)、B+(未知组分)、C+(混合物,组成未鉴定)、D+(熊去氧胆酸)、E+(猪去氧胆酸)、F+(胆酸)、G+(鹅去氧胆酸+去氧胆酸)和H+(混合物,组成未鉴定)。微量量热法评价8个敲出组分对白色念珠菌的抑制活性强弱顺序:H+G+E+C+F+A+B+D+。未知组分的组成将在下一步工作中阐明。 2.8个敲出组分分别对白色念珠菌的抑制率之和(216.78%)是牛黄母液的(36.07%)的6倍,提示这8个敲出组分之间可能存在拮抗作用关系;进一步分析发现,这8个敲出组分与其阴性样品(已从总提物中“敲出”该组分的样品,记为X-)之间均存在拮抗作用关系,拮抗作用的强弱顺序:H+与H-E+与E-G+与G-F+与F-A+与A-C+与C-D+与D-B+与B- 3.敲出的8个组分可能为结构相似的一类成分组成的化(混)合物,与白色念珠菌相互作用时,可能竞争相同的作用靶点而发生竞争性拮抗,从而导致成分与成分、组分与组分之间产生拮抗作用关系。目前,对中药中多成分之间的拮抗关系的关注较少,本研究发现了牛黄中多成分或组分间的拮抗作用关系,提示目前人工牛黄的配方可能还需进一步优化,某些拮抗成分或许可以不加入。 四、通过敲入策略,初步制定人工牛黄抗真菌药效物质的质量控制标准: 1.通过在8个敲出组分的阴性样品中“递增敲入”各组分,并对所得样品进行抗真菌活性评价,得到8个敲出组分的“量-效”关系。 2.基于“量-效”关系,得到各敲出组分的最低含量点,定为质量控制的含量下限。初步制定的8个敲出组分的含量下限:组分A+为0.062 mg/mL、组分B+为0.274 mg/mL、组分C+为0.162 mg/mL、组分D+为0.025 mg/mL、组分E+为0.231 mg/mL、组分F+为0.343 mg/mL、组分G+为0.151 mg/mL、组分H+为0.038 mg/mL。 3.具拮抗作用的组分的含量越大,反而会降低其它组分及方药整体的活性。基于“量-效”关系得到拮抗组分的最高含量点,定为质量控制的含量上限。8个组分的含量上限:组分A+为0.062 mg/mL、组分B+为0.358 mg/mL、组分C+为0.393 mg/mL、组分D+为0.031 mg/mL、组分E+为0.362 mg/mL、组分F+为0.361 mg/mL、组分G+为0.391 mg/mL、组分H+为0.40 mg/mL。 4.对各组分的含量限度范围进行优化,得到8个敲出组分的最优含量点:组分A+为0.062 mg/mL、组分B+为0.35 mg/mL、组分C+为0.375 mg/mL、组分D+为0.025 mg/mL、组分E+为0.30 mg/mL、组分F+为0.35 mg/mL、组分G+为0.375 mg/mL、组分H+为0.35 mg/mL。按照各敲出组分的活性最优含量配比(黄金比例)组合的样品的抗真菌作用比牛黄母液提高了92.21%。该结果提示,开发“源于传统,高于传统”的“组分中药”具有一定的可行性。通过敲出/敲入策略可发现组分之间的相互作用关系和“量-效”关系,为“组分中药”的研制开发提供了新思路和方法。 综上所述,本文探索建立了基于成分敲出/敲入的牛黄药效物质辨识和质量控制模式,初步辨识了人工牛黄抗真菌的关键药效物质并制定其含量的限度范围,为阐明人工牛黄的药效物质基础提供了研究思路,也为中药的药效物质辨识和质量控制提供了实用的模式和方法。
【学位授予单位】:成都中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R284

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郑永军;赵斌;尤进茂;;微波消解ICP-AES法测定牛黄解毒片中的微量元素[J];光谱学与光谱分析;2006年06期
2 胡娟娟,杜冠华;药物筛选模型研究进展[J];基础医学与临床;2001年04期
3 刘萍,古今 ,冯建涌;牛黄人工牛黄人胆结石及一种牛黄伪品的毛细管电泳法鉴别[J];解放军药学学报;2005年04期
4 殷丹;陈振江;刘焱文;;人工牛黄蛋白质的凝胶电泳实验研究[J];湖北中医学院学报;2006年01期
5 胡霞敏,石朝周;牛磺结合及其游离胆汁酸在小鼠镇咳祛痰抗炎模型上的作用比较[J];中国临床药学杂志;2001年02期
6 张启明;天然牛黄的成分研究[J];中国生化药物杂志;1995年01期
7 梁鑫淼;徐青;薛兴亚;章飞芳;肖远胜;;组分中药系统研究[J];世界科学技术-中医药现代化;2006年03期
8 钱俊;尹莲;;加味四妙丸有效部位群HPLC指纹图谱归属分析及谱效关系研究[J];世界科学技术-中医药现代化;2007年01期
9 王天成,王振宇,沈惠麒,贾光,王翔,邰昌松;胆红素和牛黄拮抗正己烷致小鼠脂质过氧化作用的初步研究[J];中国工业医学杂志;2004年06期
10 冯芳,马永建,陈明,张正行,安登魁;反相高效液相色谱蒸发光散射检测法同时测定人工牛黄中多组分含量[J];药学学报;2000年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 严睿文;;ICP-AES法测定黄山香榧中17种元素[J];安徽大学学报(自然科学版);2007年03期
2 韦玉芳;谢红;卢泳棠;雷艳娜;黄惠平;;利多卡因红花醇液外涂减轻病人静脉穿刺疼痛的临床研究[J];中医药临床杂志;2006年04期
3 王军;张薇;王玉升;刘惠霞;黄启福;;生姜水提物对脑缺血再灌注损伤的保护作用[J];中医药临床杂志;2007年01期
4 陈向涛,汪惠丽,李俊;中药复方药理研究概况[J];安徽医药;2002年01期
5 施孟如,沃兴德,卢德赵;蛋白质组学和中医药研究[J];浙江中医学院学报;2004年06期
6 郑红,杜建卫;中药指纹图谱的识别[J];北京石油化工学院学报;2005年01期
7 林桂芸;生物技术与中药现代化[J];成都大学学报(自然科学版);2001年02期
8 王晃,李梦龙,覃洁萍,刘仲义;建立中药指纹图谱 保证中药产品质量[J];成都中医药大学学报;2002年03期
9 王晃,李梦龙,覃洁萍,刘仲义;用聚类分析建立鱼腥草注射液指纹图谱[J];成都中医药大学学报;2002年04期
10 尚智;丁涛;温富春;张伟;张殿文;纪凤兰;徐惠波;;苦参碱对小鼠免疫功能的影响[J];长春中医药大学学报;2007年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈惠音;肖仔君;杨汝德;;短双歧杆菌增殖培养基的优化研究[A];第三届“益生菌、益生元与健康研讨会”论文集[C];2004年
2 周伟冰;罗健;林东教;刘士哲;;中药材GAP生产中的营养调控及无土栽培技术应用[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
3 张强;;水蛭有效成份研究与临床使用[A];第二十一届航天医学年会暨第四届航天护理年会论文汇编(下册)[C];2005年
4 董世山;刘聚祥;;高通量筛选技术在新药开发中的应用[A];河北省畜牧兽医科技创新论坛论文集[C];2007年
5 李林;方家;刘中勇;;丹参治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病之药理研究进展[A];江西省第三次中西医结合心血管学术交流会论文集[C];2006年
6 李明;李海鹰;彭艳丽;;指纹图谱技术在中药鉴定中的应用[A];“以岭医药杯”第八届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集[C];2006年
7 贺延新;;玻璃酸钠和复方当归注射液治疗膝骨关节炎的临床观察[A];中国药学会全国骨科药物与临床应用学术研讨会论文集[C];2006年
8 毛金强;张楠;;动物药质量标准规范化研究[A];第九届全国中药和天然药物学术研讨会大会报告及论文集[C];2007年
9 王微微;冀海峰;黄志尧;李海青;金春辉;鲍立曾;;中药质量预测的软测量方法研究[A];中国仪器仪表学会第六届青年学术会议论文集[C];2004年
10 谢代梁;王保良;黄志尧;李海青;金春晖;鲍立曾;;主成分回归在中药过程软测量中的应用研究[A];中国仪器仪表学会第六届青年学术会议论文集[C];2004年
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1 郭兰萍;影响苍术质量的生态因子研究[D];中国中医研究院;2005年
2 赵正保;抗肠源性内毒素药物《双利肝》的药学研究[D];山西医科大学;2005年
3 闫巧娟;蒙古黄芪中多糖、皂甙及活性蛋白的提取分离[D];中国农业大学;2005年
4 李峰;鹿鞭的生药学研究[D];辽宁中医学院;2004年
5 覃军;心脉神口服液抗实验性动脉粥样硬化作用及其机理研究[D];第三军医大学;2001年
6 张兰桐;山茱萸提取液制备及其抗心律失常活性研究[D];河北医科大学;2002年
7 孟祥晨;双歧杆菌生理功能特性及其应用的研究[D];东北农业大学;2002年
8 邢旺兴;中药通光藤活性成分的研究[D];第二军医大学;2002年
9 李玉峰;道地性川贝母的生物学研究及其GF14基因的克隆[D];四川大学;2002年
10 魏英勤;中药复方血糖宁有效部位的研究[D];山东中医药大学;2003年
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1 赵宇;枳实、枳壳色谱指纹图谱研究[D];中南大学;2005年
2 杨哲;关于进一步推进中药现代化的战略思考[D];中南大学;2004年
3 司丹丹;升麻质量评价方法及药物动力学研究[D];沈阳药科大学;2007年
4 费嘉;丁香脂素及其糖苷的全合成以及活性初探[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
5 谢彩娟;HPLC法研究中药延胡索的质量及药代动力学[D];陕西师范大学;2005年
6 陈亚;沉香化学成分和质量评价研究[D];广州中医药大学;2005年
7 张媛媛;半夏口服液的制备及临床药理作用研究[D];青岛大学;2004年
8 黄荣增;咽速康气雾剂的药学及药效学研究[D];湖北中医学院;2005年
9 黄新异;短管兔耳草化学成分的提取分离及药物分子的包合研究[D];兰州理工大学;2005年
10 顾阳;植物纤维中木聚糖的生物降解及调控[D];南京林业大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵惠茹,杨广德,贺浪冲;生物活性跟踪分离法筛选当归挥发油中的有效成分[J];时珍国医国药;2005年02期
2 谢昌礼,汤厚宽,宋昭华,屈松生,廖耀庭,刘海水;细菌生长速率的测定及其热力学性质的研究[J];物理化学学报;1989年05期
3 谢昌礼,汤厚宽,孙达远,屈松生,刘海水,廖耀庭;细胞不同代谢类型的热化学研究Ⅰ.生长、非生长及内源代谢水平的量热测定[J];物理化学学报;1996年03期
4 郝红卫,王静,张淑娟;浅论公路工程特尔菲评标法[J];交通科技与经济;2002年04期
5 于铂 ,郑丽敏 ,任发政 ,田立军 ,朱虹;利用图像处理技术估算猪肉等级评价指标的应用研究[J];肉类研究;2004年03期
6 许庆福,毕翠红,梁东,徐卫东,王增如;特尔菲法在土地利用总体规划评价中的应用[J];山东国土资源;2004年06期
7 胡志;朱敖荣;秦侠;;特尔菲方法在筛选中国农村初级卫生保健指标体系中的应用[J];中国卫生统计;1990年06期
8 钟国跃,黄小平,马开森,陈仕江,张毅,秦松云;我国黄连(味连)质量评价研究[J];中国中药杂志;2005年07期
9 濮社班,张宇和,周雪林;江苏省引种黄连的生长状况及生物碱积累[J];中国中药杂志;1998年11期
10 任佰玲,胡志,周新发,蚁敏;应用Delphi法建立住院医师规范化培训基地评价指标体系的研究[J];中华医学科研管理杂志;2004年03期
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1 吴婧;郁露;孙素琴;;栽培与野生丹参的红外光谱三级鉴定研究[A];第十四届全国分子光谱学术会议论文集[C];2006年
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1 王红燕;黄芩抗焦虑活性成分研究[D];沈阳药科大学;2002年
2 张晓哲;基于构库思想的中药分离与表征方法研究[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2004年
3 阿布拉江·克依木;黄酮苷类天然产物的质谱分析方法研究[D];中国协和医科大学;2006年
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1 李丽霞;大黄配方颗粒原料药筛选、制备工艺优化及药效学比较研究[D];成都中医药大学;2006年
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1 王强华,张翊华,任爱英,蒋选利;牛黄的超微结构研究[J];西北农业大学学报;1995年05期
2 杨耀芳,王钦茂,张伟媚,孔令胜,宿秀兰;牛黄解毒颗粒剂的解热、镇痛和抗炎作用的研究[J];安徽医科大学学报;1996年02期
3 蒲昭和;从刘海若恢复神志谈安宫牛黄丸[J];家庭医学;2003年04期
4 钱锋;;牛黄及其混淆品的鉴别[J];蛇志;2005年04期
5 于昌松 ,蔡红娇 ,巴秀云 ,夏穗生;应用人类胆囊结石形成理论制造牛黄[J];华中科技大学学报(医学版);1985年01期
6 戴俊伟,洪武奇;中药牛黄的鉴别方法[J];海峡药学;1994年03期
7 叶凤阁,于庆海,邵兰;牛黄的抗脂质过氧化作用研究[J];中国医药学报;1998年02期
8 杨峰,张银萍;浅谈贵重药材牛黄、龙眼肉的鉴别[J];中国药业;1999年06期
9 张红萍;牛黄及人工牛黄的鉴别[J];浙江中西医结合杂志;2002年07期
10 徐仙洲 ,王省三 ,吴建如;牛黄[J];中国中药杂志;1956年01期
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1 方建国;万进;王文清;蔡红娇;汤杰;;牛黄类药材的研究概况[A];2010年全国中药学术研讨会论文集[C];2010年
2 曹红霞;;牛黄及其相关中药制剂脑保护作用的实验研究进展[A];甘肃省中医药学会2010年会员代表大会暨学术年会论文汇编[C];2010年
3 丁满拴;武保福;范日升;刘永泉;张志园;;牛黄清心栓的制备与质量控制[A];全国中药研究与开发学术研讨会论文摘要集[C];2001年
4 杜晓曦;阳长明;;从牛黄的检测谈中成药质量标准的研究[A];中医药研究学术研讨会论文集[C];2004年
5 程建新;田彦玲;;牛黄天龙胶囊(含药血清)对子宫内膜癌细胞诱导凋亡的实验研究[A];全国中西医结合生殖健康学术研讨会论文及摘要集[C];2004年
6 李玉祥;;自拟“牛黄灵效丸”治疗肺癌临床体会[A];全国中西医结合教育学术研讨会论文集[C];2000年
7 张伯礼;高秀梅;商洪才;赵宜军;王永炎;;复方丹参方的药效物质及作用机理研究[A];中医药优秀论文选(下)[C];2009年
8 何欣;黄立中;;西黄丸临床应用及实验研究进展[A];西黄丸临床应用研究论文集[C];2009年
9 邵义祥;白书坪;蒲先奇;毕书增;;牛肝、胆囊粘膜超微结构和牛黄形成及产量关系研究[A];中国动物学会全国显微与亚显微形态科学分会第十次形态科学与显微注射技术学术研讨会论文摘要集[C];2000年
10 朱顺星;白书坪;蒲先奇;毕书增;;牛肝、胆道、胆囊、组织学与糖蛋白和牛黄形成及产量关系的研究[A];中国动物学会全国显微与亚显微形态科学分会第十次形态科学与显微注射技术学术研讨会论文摘要集[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 中国管理科学研究院牛黄植研中心主任 陈裕容;天然药物风行 牛黄前程似锦[N];医药经济报;2002年
2 陈可冀;珍稀牛黄古今谈[N];中国中医药报;2004年
3 ;宰牛后发现牛黄该归谁[N];吉林农村报;2005年
4 李海霞;牛黄的采集与加工[N];辽源日报;2005年
5 本报记者 龚翔;牛黄类中成药,在提高标准行动中“升级”[N];中国医药报;2009年
6 驻京记者 李瑶;中国药材集团携武汉健民共推体外牛黄产业[N];医药经济报;2009年
7 孙春秀;牛黄的真伪鉴别[N];农村医药报(汉);2008年
8 驻京记者 金丰杰;SFDA明确牛黄及其代用品使用问题[N];医药经济报;2004年
9 ;众说纷纭“牛黄案”(下)[N];人民法院报;2000年
10 毛嘉陵;加强牛黄及其代用品使用的管理[N];中国中医药报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孔维军;基于成分敲出/敲入的中药(牛黄)药效物质辨识和质量控制模式的初步研究[D];成都中医药大学;2011年
2 李秀玲;精制血府逐瘀复方配伍的药效物质基础研究[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2003年
3 宋宗华;苓桂术甘汤药效物质基础研究[D];沈阳药科大学;2002年
4 戴荣华;滋肾丸药效物质基础研究[D];沈阳药科大学;2004年
5 王治平;探讨“黄芪—葛根”药对配伍规律对药效物质的影响[D];广州中医药大学;2011年
6 周璐;金玄痔科熏洗散药效物质及其作用机理研究[D];湖北中医药大学;2011年
7 李芳;以桂枝茯苓丸方药探讨含挥发性成分复方用“半仿生提取法”研究的模式[D];山东中医药大学;2009年
8 袁海龙;蕨麻抗肝炎药效物质及其肝靶向纳米粒冻干粉针剂的药学研究[D];成都中医药大学;2004年
9 段雪云;缬草抗心律失常的药效物质及作用机理研究[D];湖北中医学院;2009年
10 董洁;基于模拟体系定量构效(QSAR)与传质模型和动力学分析的黄连解毒汤超滤机理研究[D];南京中医药大学;2009年
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1 徐瑞;大肠杆菌和ConABP对牛黄成核与核生长的影响[D];扬州大学;2010年
2 向梅先;体外培育牛黄电泳图谱及牛黄前列康栓药学部分的研究[D];湖北中医学院;2004年
3 邱昌伟;体外培植牛黄形成机理及其药理作用的研究[D];山东农业大学;2004年
4 杨光;β-G酶活性不同的大肠杆菌对体外培植牛黄产量与质量的影响[D];山东农业大学;2004年
5 戚秋鹏;pH依赖型万氏牛黄清心缓释微丸的研究[D];沈阳药科大学;2003年
6 付本懂;生物牛黄中间体药效学研究[D];河北农业大学;2003年
7 田佳;复方中药药效物质基础研究[D];沈阳药科大学;2002年
8 邱巍峰;复方中药牛黄天龙饮对人卵巢癌SK细胞和小鼠肉瘤S-180细胞抗肿瘤作用的实验研究[D];河北医科大学;2003年
9 彭凌;用医学信息学方法探讨丹参防治肝癌的作用及机制[D];湖北中医学院;2005年
10 黎燕;胆红素、牛黄对三氯乙烯细胞毒性拮抗作用的研究[D];四川大学;2004年
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