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《华南农业大学》 2018年
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一种烟草赤星病菌预警技术研究

陈凯  
【摘要】:烟草是一种茄科草本植物且具有很高的经济价值,被广泛的栽种在世界各地。烟草在我国也有大面积的栽种,并且为我国创造着巨大的经济收益。但是天灾、虫害、病害等灾害每年会对我国烟草产业造成巨大的损害。而其中又以病害造成的损失特别巨大,病害对烟草产业造成的经济损失常年维持在8%-12%左右。所以,研究检测植物病害入侵的技术,通过对病害的快速检测而降低病害对烟草产业造成的损失具有重要的实际意义。国内外已有很多研究人员在此领域开展了大量的研究,目前已有的植物病害检测技术包括噬菌体技术、PCR技术等几大类。但是这几类技术都存在着检测手段复杂、检测耗时长等缺点。烟草赤星病是一种在烟草叶片上发病的叶斑病,于烟草的生长后期发病。烟草赤星病对烟叶的危害巨大,主要体现在使烟叶品质下降和产量减少上。目前对烟草赤星病的检测技术也只有荧光PCR、噬菌体方法等几种,且几乎没有可以快速检测的方法。通过对烟草赤星病菌的研究发现,烟草赤星病菌在入侵烟叶的过程中,需首先通过分泌一种生物酶--角质酶来将烟叶表面覆盖的一层保护角质水解,在角质水解完成后烟草赤星病菌才能对烟叶做进一步的侵染。据此可知,如果能够实现在烟叶表面检测角质酶就能达到检测角质的目的。小分子荧光探针作为一种能够快速检测生物酶存在的强大检测工具将被用于本实验来检测角质酶。本文以小分子荧光探针为基础,制备了一种能够快速检测烟草赤星病菌的荧光探针。本实验主要研究了两种能够检测烟草赤星病菌荧光探针的制备方法,并且对探针检测角质酶的能力做了探究。为了进一步了解制备出的探针对烟草赤星病菌的检测情况,对探针的检测机理也进行了探究。最后将探针实际应用在烟草活体上,对其在自然条件下检测烟草赤星病的能力进行了探究。实验结论如下:(1)探针1的最大紫外吸收峰在380nm荧光发射位置在520nm,探针2的最大紫外吸收峰在440nm发射位置在510nm。基于本实验合成的两种荧光探针,烟草赤星病菌对烟草的入侵能够被快速、方便的检测到。当烟草赤星病菌入侵烟叶时,探针1和探针2的荧光都会产生明显的绿到黄的转变,且此种荧光变化可以通过肉眼在手持紫外灯下方便的观察到。(2)通过烟叶活体检测实验和PCR分析,基于本实验制备的两种荧光探针的烟草赤星病菌荧光检测方法的实用性得到了验证,在PCR分析保证烟草感染病菌为烟草赤星病菌的情况下,覆盖在烟叶表面的探针对病菌有了明显的响应。
【学位授予单位】:华南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S435.72

【参考文献】
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