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《郑州大学》 2007年
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黄芩苷的致过敏作用机制

田锋奇  
【摘要】: 黄芩苷(baicalin)是由唇形科植物黄芩的干燥根中提取的一种黄酮类化合物,是黄芩的主要有效成分之一,是黄芩及多种中药制剂如双黄连注射剂的主要质量控制指标成分。双黄连粉针自1992年被国家中医药管理局定为全国中医院急诊科首批必备中成药以来,目前已成为中医治疗感染性疾病的首选药物之一,但是,其临床广泛应用的同时,不良反应报道也日趋增多,报道称双黄连注射液过敏反应与组分黄芩苷有直接关系。 为阐明黄芩苷的致过敏作用机制,在体外制备了黄芩苷全抗原,建立黄芩苷致豚鼠过敏休克模型。通过被动皮肤过敏反应实验(PCA)分析豚鼠特异性抗体产生的规律性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射过敏原吸附试验(RAST)测定19只致敏豚鼠、16例双黄连过敏者血清中黄芩苷特异性IgG抗体,采用RAST测定16例双黄连过敏者血清中黄芩苷特异性IgE抗体,分析黄芩苷特异性IgE和IgG抗体在过敏反应发生过程中的作用。 方法与结果 1.黄芩苷全抗原的制备 采用活性酯法合成了黄芩苷全抗原,紫外扫描图谱分析黄芩苷与牛血清蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)和多聚赖氨酸(PLL)耦联成功,耦联效率分别为9:1、5:1和3:1。 2.豚鼠过敏性休克模型的建立 黄芩苷-BSA致敏的豚鼠激发后,动物迅速发生呼吸困难、翻滚卧倒、小便失禁直到呼吸停止死亡等休克症状,休克率和死亡率均为90%。组织HE染色显示:黄芩苷致敏组肺血管明显扩张,有淤血,肺泡壁增厚,而正常对照组肺组织正常,壁较薄,无血管炎等病理变化;致敏组肝组织水肿更为明显,并伴有炎症细胞和血管瘀血,显示典型的速发型过敏反应特征。 3.致敏豚鼠血清特异性IgE和IgG抗体 采用PCA测定六只致敏豚鼠血清抗体产生的规律性,豚鼠第一次致敏后19天开始检测出抗体,第31天达到高峰,之后逐渐降低。 用加热灭活后的血清致敏3h后激发PCA反应阳性,72h后激发PCA反应阴性,而同时注入体内的非灭活血清72h后激发PCA反应阳性,说明致敏豚鼠体内同时存在IgE和IgG型特异性抗体。经Spearman相关性分析,IgE和IgG两抗体之间无相关性。 采用ELISA检测19只致敏豚鼠和60例正常健康豚鼠血清中黄芩苷特异性IgG抗体,其阳性率为84%,相关性分析,致敏豚鼠黄芩苷特异性IgG水平与PCA所测特异性IgG抗体效价之间有相关性(P<0.05)。 4.肥大细胞脱颗粒和离体回肠收缩实验 致敏血清原液处理组经抗原攻击后,有大量肥大细胞膜不完整,颗粒脱出胞外,脱颗粒率为(72.63±11.45)%,阴性对照组脱颗粒率为(26.75±6.88)%,见表9。经配对样本t检验,模型组肥大细胞脱颗粒率显著高于阴性对照组(P<0.01),与阳性对照组血清原液处理组阳性率(68.75±10.99)%无统计学意义(P>0.05)。 另外,黄芩苷-BSA致敏豚鼠离体回肠经黄芩苷-HSA激发后收缩明显,组胺释放量大约为8μg,阴性对照组经黄芩苷-HSA激发后,离体回肠收缩不明显。 5.双黄连过敏者血清特异性IgE和IgG抗体 采用ELISA和RAST分别检测16例双黄连过敏者和60例正常人血清中黄芩苷特异性IgE和IgG抗体,阳性率分别为25%和37.5%,经Independent-Sample t检验,过敏者特异性IgE和IgG抗体水平均高于正常对照组(P<0.01)。经Spearman相关性分析,过敏者血清中两种特异性抗体之间无显著相关性(P>0.05),其抗体水平与过敏反应发生的时间长短也无显著相关性(P>0.05)。 结论 1.采用活性酯法成功合成了黄芩苷全抗原。 2.成功建立了黄芩苷致豚鼠过敏休克模型。 3.黄芩苷所致豚鼠过敏性休克、肥大细胞脱颗粒及离体回肠收缩均与过敏介质的释放有关。 4.黄芩苷所致豚鼠及人体过敏反应与其特异性IgG、IgE抗体有关。
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R285

【引证文献】
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10 许方美;黄芩苷单克隆抗体的制备及其应用[D];厦门大学;2009年
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