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《山东中医药大学》 2010年
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清肝抑纤饮及其拆方防治大鼠肝纤维化的实验研究

贾爱芹  
【摘要】:目的: 观察清肝抑纤饮及其拆方对大鼠肝纤维化的防治作用,并探讨其作用机制。 方法: 110只Wistar大鼠按随机原则分为9组。空白对照组给予普通饲料喂养,自由饮水。其余各组均给予四肢及背部皮下注射40% CCl4-花生油溶液,按照0.3 ml/100g,每周注射两次,同时给予中药或生理盐水灌胃,共8周。8周后进行成模检验,明确造模成功后,将其余大鼠全部处死,测量大鼠体重及肝脏湿重,计算肝脏脏器指数;检测各组大鼠血清肝功能指标(ALT、AST、ALB)、血清肝纤维化指标(HA、LN、C-IV);检测各组大鼠肝组织匀浆丙二醛(MDA)含量以及超氧化物岐化酶(SOD)活性;ELISA法检测大鼠肝组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-a)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及组织金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)浓度;采用RT-PCR法检测肝组织TGF-β1 mRNA表达;TUNEL一步法检测肝星状细胞凋亡;肝组织病理学观察:HE染色半定量观察肝组织炎性程度;Masson染色观察肝内胶原沉积与降解状态;免疫组织化学的方法观察α-SMA在各组大鼠肝组织内的表达,结果作定量分析。 结果: 实验数据经统计学处理后发现:1、清肝抑纤饮及其拆方可使血清ALT、AST含量下降,ALB升高,升高SOD活性,降低MDA含量,显著改善肝脏炎症程度及减轻脂质过氧化损伤,全方组疗效优于各拆方组,拆方研究发现方中清热解毒及凉血活血药物起主要作用;2、清肝抑纤饮及其拆方可使肝组织中α-SMA表达明显降低,抑制HSC活化,方中清热解毒与凉血活血药物的配伍在抑制HSC活化过程中起主要作用,各治疗组大鼠HSC凋亡率均有所升高,但与模型组比较无显著性差异;3、肝纤维化大鼠TGF-p1从mRNA到蛋白水平均明显异常表达,其升高程度与肝纤维化的严重程度相关,清肝抑纤饮及其拆方可明显降低其表达,与模型组比较均有显著性差异(P0.01,P0.01);4、清肝抑纤饮及其拆方可显著降低肝组织TNF-α含量,含有清热解毒药物的组别疗效明显;5.清肝抑纤饮及其拆方可使TIMP-2降低,提高MMP-2/TIMP-2比例,含有凉血活血药物的组别疗效较为显著,其中全方组疗效最好,与模型组比较有显著性差异(P0.01)。 结论: 清肝抑纤饮具有明确的防治肝纤维化作用,其主要作用机制为: 1、减轻肝细胞变性坏死及肝脏脂质过氧化损伤程度,改善肝脏炎症,提高其抗氧化能力,促进肝细胞修复,从而减少或消除肝纤维化的诱发因素,以阻断肝纤维化的起始环节; 2、抑制HSC的活化,促进其凋亡,减少肌成纤维母细胞数量,从而减少ECM合成,减缓肝纤维化的进程; 3、降低促肝纤维化因子TGF-β1及TNF-α在肝内的表达,从而阻断纤维化形成过程中细胞因子网络传递; 4、降低肝组织内TIMP-2浓度,使MMP-2/TIMP-2比例增高,促进已形成的ECM降解加速,从而减轻肝纤维化程度并促进其逆转。
【学位授予单位】:山东中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285.5

【参考文献】
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