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《山东农业大学》 2004年
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β-G酶活性不同的大肠杆菌对体外培植牛黄产量与质量的影响

杨光  
【摘要】:本研究包括4个试验,试验一测定了在不同条件下埃希氏大肠杆菌产生的β-G酶的活性,确定该酶发挥作用的最适条件;试验二测定了不同血清型的埃希氏大肠杆菌产生的β-G酶的活性,作为选择牛黄菌种的指标之一;试验三利用屠宰胆汁测定了五种不同血清型埃希氏大肠杆菌在一定条件下将结合胆红素(CB)转化为游离胆红素(UCB)的效率;试验四结合上述指标将两种不同血清型的菌种等量组合,测定其β-G酶的活性、结合胆红素的转化率、体外培植牛黄产量与质量,以及胆酸(CA)含量,从而确定植黄菌种的最佳组合。主要结果如下: 试验一 大肠杆菌β-G酶活性影响因素的测定 本试验主要探讨了温度、pH值、Ca2+、乙二醇等因素对β-G酶活性的影响。结果表明:温度升高可显著提高该酶的活性(P0.01),且在55℃时,其活性比在37℃提高近4.1倍;该酶的最适pH值为7.0;Ca2+在0.5mMol/L-10mMol/L浓度范围内对该酶具有激活作用且与浓度成正比,在10mMol/L时其激活作用最大;乙二醇在0.3Mol/L-3Mol/L的浓度范围内对该酶具有激活作用,其最适浓度为1.5Mol/L。 试验二 不同血清型大肠杆菌β-G酶的活力测定 在试验一确定的β-G酶最适作用条件的基础上,采用改良Fishman法测定了编号分别为EcoⅠ、EcoⅡ、EcoⅢ、EcoⅣ、EcoⅤ的五种不同血清型大肠杆菌产生的β-G酶的活性;在500ml引流胆汁中分别加入10ml、20ml、40ml大肠杆菌肉汤培养液(含菌量为3.2×108个/ml),在不同反应时间进行大肠杆菌计数。结果表明:EcoⅠ、EcoⅡβ-G酶的活性分别为120.20±11.68 u/L、117.30±10.73 u/L,明显高于EcoⅢ、EcoⅣ、EcoⅤ(p0.01),EcoⅠ、EcoⅡ之间差异不显著(p0.05),EcoⅢ的β-G活性为91.52±19.45 u/L;EcoⅣ的β-G活性为30.41±14.12 u/L;Eco WP=9 Ⅴ的β-G活性为29.11±11.32 u/L;EcoⅢ明显高于EcoⅣ和EcoⅤ(P 0.01);EcoⅣ和EcoⅤ之间的差异不显著(p0.05);胆汁中分别加入10ml、20ml、40ml大肠杆菌营养肉汤培养液,经过16h的培育期其含菌量显著降低(P 0.01),含菌量的降低与加入的菌液量关系并不明显(p0.05)。 试验三 不同血清型大肠杆菌的结合胆红素转化率试验 应用一定量的屠宰胆汁,经60Coγ-射线辐照灭菌后加入氯仿除去UCB,测定处理后的胆汁胆红素含量,然后平均分为5份, 分别加入不同血清型的大肠杆菌,测定CB转化率。结果表明:EcoⅠ、EcoⅡ的CB转化率分别为64.25%±26.83%和57.14%±21.88%,明显高于EcoⅢ、EcoⅣ(p0.01),EcoⅢ、EcoⅣ的CB转化率分别为28.57%±13.22%和23.19%±11.33%,EcoⅠ、EcoⅡ、EcoⅢ、EcoⅣ都明显高于EcoⅤ(p0.01)。 试验四 不同血清型大肠杆菌的组合试验 将EcoⅠ与EcoⅡ、EcoⅠ与EcoⅢ、EcoⅡ与EcoⅢ分别等量混合,编号为EcoA、EcoB、EcoC,然后测定各组β-G酶的活性、CB的转化率、胆汁沉淀物的重量以及胆汁沉淀物中CB及胆酸的含量,并比较各个组合的差异、组合与单一菌株和无菌种组的差异。结果表明:EcoⅠ的β-G酶活性最高,其余各组β-G酶的活性顺序为EcoⅡ、EcoA、EcoⅢ、EcoB、EcoC 和无菌种处理组;EcoⅠ的CB转化率最高,为64.35%±15.36%,无菌种处理组的CB转化率最最低,为13.22%±9.63%;EcoA组的胆汁沉淀物的重量最大,为3.23mg,明显高于其它各组;EcoⅢ组的胆汁沉淀物的重量最小,为1.06mg;EcoⅠ与EcoⅡ的胆汁沉淀物中CB含量分别为12.29±0.91% 和 10.77±1.24%,明显高于其它各组,但EcoⅠ与EcoⅡ之间差异并不显著(p0.05);EcoA、EcoB、EcoC的胆汁沉淀物中CB含量分别为9.11±0.56% 、7.98±1.33%、7.32±0.68%,都明显高于无菌种处理组(P 0.01);EcoA CA含量最高,为6.53±0.16%,无菌种组最低,为2.67±0.48%从结果来看,各组合组的胆汁沉淀物重量都高于各组分,但胆汁沉淀物中CB含量比各组分低。综合判断,菌种组合要优于菌种单独使用。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S823

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