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《厦门大学》 2017年
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植物源性组织工程角膜上皮载体的开发与应用研究

陈佩  
【摘要】:目的:本文以洋葱表皮膜(Onion Epithelial Membrane,OEM)作为培养角膜上皮细胞的支架材料,探究植物源性材料作为构建组织工程角膜材料的可行性。方法:通过透明度实验评估OEM的光学特性;通过扫面电镜和透射电镜观察OEM表面特征和超微结构;以OEM为载体培养不同类型细胞系和原代细胞,并与培养皿比较其贴壁生长状态和细胞形态;将分离的兔角膜上皮细胞接种到OEM、胶原Ⅳ包被 OEM、PETM(Polyethylene Terephthalate Membrane)上,观察兔角膜上皮细胞(Rabbit corneal epithelial cells,RCEs)3d、5d、7d 的连续生长状态,利用气-液界面培养方法构建组织工程角膜上皮;扫面电镜观察角膜上皮细胞的超微结构;通过苏木素-伊红(HE)染色观察形成的组织工程角膜上皮的组织学结构;通过免疫荧光染色检测细胞分化蛋白(K3/K12、Cytokeratin)与细胞连接蛋白(β-Catenin、E-cadherin)的表达情况。结果:透明度实验表明干湿两种状态下与PETM材料相比都具有良好的光学透明性;扫描电镜结果观察新鲜OEM与处理后OEM无明显变化,呈表面光滑状态,胶原Ⅳ包被组OEM可见胶原颗粒状散布于OEM上;以OEM为载体培养的细胞系和原代细胞,与培养皿上的细胞形态和生长状态相比无明显差异;以OEM为载体的RCEs较PETM组可以更好的维持细胞形态,具有更立体的细胞结构,更清晰的细胞连接,更多的微绒毛数量;以OEM为载体构建的组织工程角膜上皮具有细胞间连接紧密的组织学结构;细胞连接蛋白(β-catenin和E-cadherin)和角膜上皮分化蛋白K3/K12表达呈阳性说明OEM可以形成细胞连接和维持角膜上皮表型。结论:基于OEM载体构建的组织工程角膜上皮具有一定的角膜上皮组织学结构,能够维持角膜上皮细胞的正常分化和形成细胞连接,该材料有望成为一种新的组织工程角膜构建载体材料。
【学位授予单位】:厦门大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R318.18

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