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《浙江大学》 2003年
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金银花中绿原酸提取、分离纯化工艺和活性研究

张星海  
【摘要】: 金银花是忍冬科植物忍冬的干燥花蕾,是临床常用的中药材之一;绿原酸是其中主要有效成分,具有显著的清热解毒、抗菌消炎作用,同时还具有增香和护色功能,可用于食品和果品的保鲜防腐。本论文主要用比较研究的方法,研究绿原酸的提取、分离、纯化工艺,并对提取物进行成分鉴别和活性研究。结果如下: 1.提取工艺 用8倍金银花质量体积(g/ml)的70%乙醇在pH值约为4,体系温度60℃条件下,回流振荡浸提2次,每次提取2小时,可使绿原酸提取率大于92%,浸膏提取率约33%,绿原酸含量18.58%。 2.分离纯化工艺 采用两步相结合方案:a.运用Zn~(2+)对提取物初步沉淀分离;b.用JAD—1400大孔吸附树脂进一步分离纯化,同时剔除第一步富集分离时带入的杂质成分。 Zn~(2+)对提取物初步沉淀分离: Zn~(2+)沉淀绿原酸的最佳条件为:在含绿原酸200mg/ml的溶液中,调pH值为5.6,1MZnCl_2加入体积量X(ml)与绿原酸沉淀率y(%)的线形回归方程为:y=7.78314+43.39277x;绿原酸-锌盐的最佳转溶条件为:用pH1.5的酸溶液,以料酸比1∶3(v/v)于60℃水中转溶15min,绿原酸转溶率达81.35%以上。 JAD-1400大孔吸附树脂分离纯化: 上样吸附:饱和浓度的提取物溶液,调pH值为3,加NaNO_3使之浓度为7%,按每毫升树脂吸附0.83ml饱和溶液,以12ml/min流速上样(层析柱规格:3.5×80cm,树脂体积:721.2cm~3); 洗脱分离:先用蒸馏水按适当流速冲洗2倍床体积,再用20%乙醇以15ml/min流速洗脱1.5倍床体积,后改用45%乙醇按适当的流速洗脱1.5倍床体积,收集馏分,最后用95%乙醇洗脱再生树脂;最后分离收集的馏分浓缩干燥,绿原酸含量为83.3%,得率为38%。 3.提取物成分鉴别和活性研究 利用TLC、HPLC、UV—S分别对提取物进行成分鉴别,得出与对照物有非常 朴!似的图谱,说明提取物中的主要成分就是绿原酸,从而验证“物质分阶’与“活性 分离”的!司步性。 活性研究表明:绿原酸具有抗氧化、清除自山基、抗菌活性。在抗氧化方面, 绿原酸随浓度增加抗氧化能力增强,高纯度强于低纯度的绿原酸,但都要弱于茶多酚。 在清除自山基方面,绿原酸具有较强的清除能力,具有选择性,纯度不同清除能力相 差较大:低纯度绿原酸清除 DPPH、·OH的 IC50分别为 327mg/l、1432mg/l,高纯度 绿原酸相应为 65mg/l、135 mg/l;茶多酚在清除 DPPH能力上要强于高纯度绿原酸, 而在清除·OH能力上却不及低纯度绿原酸,其相应 IC50分别为 52mg/l和 1908 ITlg/1。 在抗菌活性方面,绿原酸对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有较强的抑制作用,对金黄 色葡萄球菌抑制,高纯度绿原酸抗菌活性MIC是低纯度绿原酸的2倍,但对大肠杆 菌抑制却没有统计上的差异性;茶多酚抑菌效果要强于绿原酸。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:TQ461

【引证文献】
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