收藏本站
《南京中医药大学》 2014年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于“银翘”药对的中药制剂生物有效性综合评价体系的构建与应用

周伟  
【摘要】:中药复方制剂由于多组分产生的多靶点生物效应特点使其生物有效性难以评价,剂型设计与技术应用更难以进行,建立与中药制剂效应相关的可量化的生物有效性综合评价体系及合适的制剂学技术应用不仅是中药制剂基本科学问题,更是中药现代化研究的关键。 中药制剂生物有效性综合评价体系的建立及制剂学应用存在以下技术瓶颈:①以网络效应形式表达的中药制剂功效所对应的多组分活性成分及其构效与量效关系的复杂性使得与中药制剂生物有效性表达相关的活性成分群难以辨识;②中药制剂多组分体内过程及其相互影响规律难以阐明,综合体系难以构建;③中药活性成分群及伴生物质群理化性质的复杂性使得中药制剂剂型设计、技术选择陷入困窘。如何运用合适的手段快速、正确的辨识活性成分群,打破中药制剂过程质量控制标准不完善的技术瓶颈?如何表征中药制剂生物药剂学的综合评价体系,打破中药制剂剂型改革与技术应用量化标准不完善的技术瓶颈?针对活性成分群整合药代动力学-Integrated AUC氏,如何选择适合的药剂学技术提高Integrated AUC?等等关键问题均有待进一步研究。 因此,本课题以生物药剂学与药代动力学为基础,选择临床配伍最小单位“药对”—“银翘”为研究对象。作者针对活性成分群难以辨识,创新性地提出'Drug-drug interaction结合ΣK-PD相关性辨识‘银翘,药对主要活性成分”及“‘生物效应放大,佐证‘银翘,药对中金银花、连翘主要活性成分”等思路来辨识、佐证“银翘”药对主要活性成分,通过“‘抗病毒效价-IC50’分析研究‘银翘’药对整合药代动力学-Integrated AUC的思路来评价“银翘”药对生物有效性,针对中药制剂剂型设计、技术选择等瓶颈,作者选择简单的药剂学手段—吸收促进剂技术,并通过‘"Integrated AUC研究调控市售‘银翘’制剂抗病毒生物活性”的思路成功应用于市售四种制剂(双黄连口服液、银翘解毒片、复方芩兰口服液、清热解毒口服液),显著提高了制剂的抗病毒疗效。 UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS结合UPLC-ESI-MS/MS定性、定量“银翘”药对体内外化学成分的研究结果表明,利用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS,共检测体外化合物35种,包括了酚酸类7种(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、奎宁酸、咖啡酸),苯乙醇苷5种(异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘酯苷D、连翘酯苷E),黄酮类7种(芦丁、异槲皮苷、金丝桃苷、紫云英苷、木犀草苷、槲皮素、木犀草素),异黄酮类2种(染料木苷、染料木素),木脂素类9种(牛蒡子苷、连翘苷、松脂素-β-D-glucoside、牛蒡子苷元、松脂素、连翘脂素、表松脂酚、表松脂酚-β-D-glucoside、松脂素单甲基醚),皂苷类2种(灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙),环烯醚萜类3种(马钱苷、当药苷、Centauroside)。纵观国内外文献及现有对照品信息,创新性的开发了一种UPLC-ESI-MS/MS同时快速定量“银翘”药对26种指标性成分的方法。并利用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析了“银翘”药对血中“移行成分”,结合体外分析结果,共检测体内化学成分32种,其中包括29种原形化合物,分别为酚酸类7种(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、奎宁酸、咖啡酸),苯乙醇苷5种(异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘酯苷D、连翘酯苷E),黄酮类7种(芦丁异槲皮苷、金丝桃苷、紫云英苷、木犀草苷、槲皮素、木犀草素),异黄酮类2种(染料木苷、染料木素),木脂素类7种(连翘苷、松脂素-β-D-glucoside、牛蒡子苷元、松脂素、连翘脂素、表松脂酚、表松脂酚-β-D-glucoside),环烯醚萜类1种(马钱苷)。且通过MetWorks软件及文献的比对,发现3种代谢产物,根据其质谱裂解规律,分别为A1#(松脂酚-o-glucuronide),A2#(表松脂酚-o-glucuronide),A3#(连翘脂素-o-glucuronide)。基于“入血物质才可能为活性成分”,以上29种化合物可作为体内研究对象,并作为指标性成分来代表“银翘”药对,但限于现有对照品缘故,且①松脂素、连翘脂素、表松脂酚在“银翘”提取液中含量甚低;②表松脂酚-β-D-glucoside、松脂素-β-D-glucoside虽为同分异构体,质谱显示其具有相同的裂解规律(相同的母离子、子离子),但UPLC-ESI-MS/MS分析“银翘”药对药代动力学时,发现血中只检测到松脂素-β-D-glucoside,并未见表松脂酚-β-D-glucoside;(③具有类似母核的化合物具有相同的吸收机制,如:苯乙醇苷类,通过研究异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B来推测连翘酯苷D、连翘酯苷E具有一定的科学性。因此,基于以上分析,我们选择29种指标性成分中23种,即:酚酸类7种(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、奎宁酸、咖啡酸),苯乙醇苷3种(异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B),黄酮类7种(芦丁、异槲皮苷、金丝桃苷、紫云英苷、木犀草苷、槲皮素、木犀草素),异黄酮类2种(染料木苷、染料木素),木脂素类3种(连翘苷、松脂素-β-D-glucoside、牛蒡子苷元),环烯醚萜类1种(马钱苷)作为“银翘”药对体内研究对象。 Drug-drug interaction(DDI)结合ΣPK-PD相关性辨识“银翘”药对主要活性成分的研究结果表明,利用体外化学成分DDI、肠吸收屏障DDI结合体内生物活性成分DDI三种模型共同辨识了“银翘”药对配伍前后变化,并通过HCA结合PCA手段确定了异连翘酯苷、3,5-二咖啡酰奎宁酸、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、连翘酯苷A为影响“银翘”药对配伍的活性成分群(Chemical markers),且通过PLS分析了标志性成分的PK(∑PK)与抗病毒PD的相关性进一步确定了咖啡酰衍生物:3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、隐绿原酸、绿原酸、新绿原酸、异连翘酯苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A为抗病毒主要的Chemical markers。 “生物效应放大”佐证“银翘”药对中金银花、连翘主要活性成分的研究结果表明,咖啡酰衍生物肠吸收机制均为被动转运,且主要受细胞旁路影响。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸可能为P-gp、MRP2及BCRP的共同底物,而异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B可能为P-gp和MRP2的共同底物。通过比较金银花、连翘提取液与咖啡酰衍生物单体吸收特征,发现金银花提取液中酚酸类外排小于单体,但连翘提取液中苯乙醇苷类外排大于单体。但由于吸收均较差,且外排率(Efflux ration)小于1,判别其吸收屏障与单体类似亦为紧密连接。采用壳寡糖技术提高了金银花、连翘提取液中咖啡酰衍生物生物利用度,发现其抗病毒效果大大提高,则从侧面佐证了金银花、连翘提取液中Chemical markers,即通过提高所为Chemical markers体内暴露,是否可提高疗效?反证Chemical markers选择的合理性。 “抗病毒效价-IC50"分析研究“银翘”药对咖啡酰衍生物整合药代动力学-IntegratedAUC的研究结果表明,咖啡酰衍生物体外抗病毒活性顺序为:连翘酯苷A连翘酯苷B3,4-二咖啡酰奎宁酸≈异连翘酯苷3,5-二咖啡酰奎宁酸新绿原酸绿原酸隐绿原酸。然而,异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B体内暴露水平却远远低于绿原酸。作者通过连翘酯苷A“敲入”“银翘”药对后进行整合药代动力学研究表明,尽管抗病毒效价AUE显著提高了,但“曲线下面积(AUCO-w)”设置权重系数的Integrated AUC却无显著性影响,而“抗病毒效价-IC50"设置权重系数的Integrated AUC显著增加。通过“效价-IC50"设置权重系数得咖啡酰衍生物整合药代动力学曲线,DAS2.1.1分析药代动力学参数,发现T1/2、AUC、 Cmax、MRT充分兼顾了各个咖啡酰衍生物的药代动力学特征,且整合药代动力学曲线与抗病毒效应具有良好的关联性,表明了在某种条件下,“曲线下面积(AUCOw)"设置权重系数只具备数学意义,忽略了成分之间效应的贡献,而“抗病毒效价-IC50"设置权重系数更具科学性。 "Integrated AUC"研究调控市售“银翘,,制剂抗病毒生物活性的研究结果表明,“银翘”药对肠吸收屏障位于紧密连接。并通过以下三点标准筛选“银翘”药对制剂,即:①具有相同组成的“银翘”化学成分;②“银翘”药对在制剂中作为主要药物组成;③具有与“银翘”,药对类似的肠吸收屏障。结果发现四种市售制剂(双黄连口服液、清热解毒口服液、复方芩兰口服液、银翘解毒片)符合标准。通过研究壳寡糖对市售“银翘”制剂Integrated AUC及抗病毒活性的影响,发现壳寡糖自身不具备抗病毒活性,且不能促进“敲除”“银翘”药对的“银翘”制剂抗病毒活性,但可提高“银翘”药对制剂的病毒抑制率,说明了壳寡糖提高“银翘”制剂抗病毒活性的确是提高了“银翘”药对体内暴露水平,且发现“银翘”药对中各咖啡酰衍生物生物利用度及Integrated AUC亦不同程度的提高,从侧面证明了咖啡酰衍生物确实为“银翘”药对Chemical markers,控制着“银翘”药对的抗病毒疗效,亦证明了“‘抗病毒效价-IC50'分析研究‘银翘’药对咖啡酰衍生物整合药代动力学-Integrated AUC思路的合理性,并成功利用吸收促进剂-壳寡糖对“银翘”药对制剂进行了二次开发。 本文采用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS结合UPLC-ESI-MS/MS定性、定量“银翘”药对体内外化学成分,通过Drug-drug interaction结合ΣPK-PD相关性辨识“银翘”药对主要活性成分,进而应用“生物效应放大”佐证“银翘”药对中金银花、连翘主要活性成分,并根据“抗病毒效价-IC50”分析研究“银翘”药对咖啡酰衍生物整合药代动力学-IntegratedAUC”,以"Integrated AUC"研究调控市售“银翘”制剂抗病毒生物活性。研究思路与方法对中药制剂生物药剂学开展具有一定指导意义。
【学位授予单位】:南京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R285

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 范令刚;蔡孝华;;静态顶空进样气质联用法测定连翘花的头香成分[J];长春中医药大学学报;2009年02期
2 徐路;付海燕;姜宁;俞晓平;;基于偏最小二乘回归的类模型方法用于中药牛黄的真伪鉴别[J];分析化学;2010年02期
3 ;A new forsythenside from Forsythia suspensa[J];Chinese Chemical Letters;2008年10期
4 刘雄;高建德;;金银花质量控制、化学成分及药理学研究进展[J];甘肃中医学院学报;2006年04期
5 潘瞾瞾;王雪峰;岳志军;闫丽娟;南春红;;金银花、连翘配伍提取物体外抗甲型流感病毒FM1株的实验研究[J];甘肃中医学院学报;2007年02期
6 阎姝;徐茂玲;图雅;李惠芬;孙素琴;;红外光谱法对双黄连粉针剂的定性定量分析[J];光谱学与光谱分析;2009年06期
7 沈林峰;沈掌泉;;应用近红外光谱和偏最小二乘回归法预测玉米中淀粉含量[J];化学分析计量;2008年06期
8 孔维军;赵艳玲;山丽梅;肖小河;郭伟英;;左金丸及类方HPLC指纹图谱与生物热活性的“谱-效”关系研究[J];化学学报;2008年22期
9 陈玉爽;张胜波;;HPLC法测定复方芩兰口服液中绿原酸的含量[J];黑龙江医药;2012年04期
10 杨希;顾政一;沙先谊;贺金华;方晓玲;;金丝桃苷在Caco-2细胞模型中的跨膜转运方式[J];中国临床药学杂志;2012年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 林丽美;以银翘药对为对象探讨建立中药药效物质快速发现的方法[D];中国中医科学院;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜娟;中药抗肿瘤免疫的研究进展[J];中医药临床杂志;2004年05期
2 刘开永;孙晓菲;侯玉泽;李松彪;李道敏;张世刚;曾振灵;陈杖榴;;中兽药的血清药物化学研究动态[J];安徽农业科学;2008年20期
3 褚秀玲;苏建青;韦旭斌;;中药抗大肠杆菌病研究进展[J];安徽农业科学;2008年21期
4 艾霞;董雪婷;王丽洁;韩雪;罗春蕊;;连翘叶水提取物对小鼠急性毒性和微核试验[J];安徽农业科学;2011年11期
5 王进明;王瑞娜;范圣此;;野生连翘资源调查与分析[J];安徽农业科学;2012年15期
6 陈伟薇;李俊;宋珏;;药物肠吸收的研究方法进展[J];安徽医药;2009年04期
7 徐丽;时乐;徐立;;中药复方物质基础研究方法的探讨[J];安徽医药;2010年01期
8 郑世瑞;李俊;宋珏;;中药复方药动学研究的新思路[J];安徽医药;2010年11期
9 张善堂,王钦茂,陈礼明;中药复方药物动力学研究进展[J];安徽中医学院学报;2000年03期
10 袁美燕;吴虹;;PK-PD模型在中药药物代谢动力学中的应用[J];安徽中医学院学报;2009年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;Research on the Daily Administration Times of Composite Yinchen tablet in Iceteric Rats Based on PD/PK Model[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
2 武新安;魏玉辉;宋刚;罗建云;刘晓峰;;黄芪血清药物化学动态谱初步研究[A];首届中国中西部地区色谱学术交流会暨仪器展览会论文集[C];2006年
3 刘开永;曾振灵;;HPLC-MS法研究鸡内服穿心莲超微粉的血清药物化学[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
4 严其高;黄正明;;中药新药药物代谢动力学的研究进展[A];中国成人医药教育论坛(4)[C];2011年
5 王玉华;容蓉;魏英勤;袁久荣;;中药方剂四物汤有效部位的血清药化学研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
6 李孝栋;杨志琦;郑亚云;王红梅;李峰;;明确中药药效物质基础和提高中药制剂有效性的可行性途径的研究[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
7 邹忠梅;杨峻山;;新中国成立60年中药研究成就回顾与展望[A];第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C];2009年
8 肖小河;鄢丹;袁海龙;王伽伯;金城;;基于成分敲除/敲入的中药药效组分辨识与质量控制模式的商建[A];第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C];2009年
9 朱容慧;赵军宁;毕岳琦;吴懿;杨霞;;中药肠吸收动力学的研究进展[A];第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C];2009年
10 韩雪;陈奇;薛佳;胡扬;;Caco-2细胞模型在中药口服吸收及机制研究中的应用[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜登钊;中药百部归经的研究及其在海洋中药研发中的应用[D];中国海洋大学;2010年
2 魏希颖;连翘种子挥发油化学成分、生物学活性及其自乳化药物传递系统的研究[D];陕西师范大学;2010年
3 尹浩;地中海贫血筛查指标的FTIR/ATR光谱分析方法研究[D];暨南大学;2010年
4 黄富荣;人体血液胆固醇、甘油三酯近红外光谱无试剂分析方法研究[D];暨南大学;2010年
5 罗云波;白术茯苓汤调控脾虚大鼠血管活性肠肽的物质基础研究[D];成都中医药大学;2010年
6 张为民;太白蓼和朱砂七提取物抗病毒及抑菌活性研究[D];西北农林科技大学;2010年
7 尚永辉;主—客体分子间相互作用的光电分析及人工神经网络预估研究[D];西北大学;2011年
8 赖玲;三七总皂苷口服肠溶制剂的研究[D];广西医科大学;2011年
9 孙晓芳;三七总皂苷防治博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的实验研究[D];北京中医药大学;2011年
10 曹颖;双黄连及清开灵对产ESBLs大肠埃希菌抑菌作用的研究[D];北京中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 谷艳;冠心Ⅱ号不同配伍方及不同剂型对丹参素、阿魏酸药代动力学的影响[D];郑州大学;2010年
2 梅君;浓缩六味地黄丸中马钱苷的药代动力学研究[D];湖南中医药大学;2010年
3 张恒;中药“复方黄连散”防治仔猪大肠杆菌性腹泻机理的研究[D];中国农业科学院;2010年
4 张凤巧;心肌康方案对成人病毒性心肌炎急性期患者中医证候疗效的初步观察[D];河南中医学院;2010年
5 史海蛟;树舌多糖GF对荷瘤小鼠H_(22)细胞端粒酶活性及CDK2的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
6 程再功;双黄连系列制剂中连翘有效成分的定性定量及口服液指纹图谱研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
7 王秋明;肝病Ⅰ号治疗慢性乙型病毒性肝炎的回顾性研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
8 车艳丽;凉血消斑汤合三粉对特发性血小板减少性紫癜模型小鼠造血系统及TNF-α、IL-4的影响[D];山东中医药大学;2010年
9 王静;连翘防治化疗性恶心呕吐的5-HT机制研究[D];山东中医药大学;2010年
10 王伟;胃康舒胶囊治疗幽门螺杆菌相关性胃溃疡的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 马彦芳;;金银花抗氧化作用的研究[J];安徽农业科学;2007年11期
2 朱治富,李成网;复方双花糖浆质量控制研究[J];安徽医药;2001年04期
3 季雪峰;金银花药理学研究[J];安徽医药;2003年04期
4 李颖;中药药代动力学研究方法概况[J];安徽中医学院学报;2005年03期
5 侯冬岩,回瑞华,杨梅,郭华,朱永强;抗病毒草药金银花的化学成分分析[J];鞍山师范学院学报;2003年04期
6 张云;连翘的一种新混淆品──秦连翘[J];浙江中医学院学报;1997年06期
7 余道军,万海同;抗流感病毒中药研究概况[J];浙江中医学院学报;2002年05期
8 杨光;试论中药现代化[J];北京中医;2000年01期
9 刘自明;中药退热灵合剂的解热作用分析[J];北京中医;1999年02期
10 王海玲;刘宁;刘志强;刘忠英;张寒琦;周秋丽;;利用Caco-2细胞模型模拟槲皮素和芦丁在小肠的吸收[J];吉林大学学报(医学版);2007年01期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 武新安;魏玉辉;宋刚;罗建云;刘晓峰;;黄芪血清药物化学动态谱初步研究[A];首届中国中西部地区色谱学术交流会暨仪器展览会论文集[C];2006年
2 蒋士鹏;杨一令;来平凡;;微透析技术在中药有效成分筛选中的应用述评[A];2007年中华中医药学会第八届中药鉴定学术研讨会、2007年中国中西医结合学会中药专业委员会全国中药学术研讨会论文集[C];2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 刘悦;连翘水提物的化学成分研究[D];沈阳药科大学;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026


丁香五月 啪综合