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《黑龙江中医药大学》 2004年
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仙鹤草指纹图谱的建立及其抗肿瘤作用机制研究

吴琳华  
【摘要】:仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb)也叫龙牙草,是蔷薇科植物龙牙草的干燥地上部分。主要功效为收敛止血、止痢、补虚杀虫。现代医学研究表明,具有抗凝血、杀虫、镇痛、生白作用,临床也用于肺癌、肝癌、胃癌、肠癌等多种肿瘤的治疗。本文建立了仙鹤草的HPLC指纹图谱,对仙鹤草水提液的抗肿瘤机制进行了研究。 仙鹤草指纹图谱的研究采用HPLC法,对不同产地的仙鹤草药材进行了指纹图谱研究。仪器选用美国Waters公司生产的高效液相色谱分析系统,616高压平流泵,717自动进样器,996二极管阵列检测器,2010色谱管理系统。色谱条件选择Hyperosl ODS C_(18)谱柱(200mm×4.6mm,5um),乙腈-1%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长为280nm,进样量10ul,流速1ml/min。流动相及梯度程序为:乙睛:1%磷酸水溶液(时间:A%):(0-0)→(20-20)→(30-20)→(31-40)→(47-60)→(55-90)→(56-100)→(70-100)。指纹图谱各特征峰的相对保留时间均在平均相对保留时间的±1之内,各特征峰的相对峰面积的RSD%均小于5%。不同产地仙鹤草色谱图显示,有7个色谱峰为8种仙鹤草所共有,确定它们为共有峰。各产地的仙鹤草也显示了各自的指纹特征。本实验建立的仙鹤草指纹图谱重现性好,精密度高,方法稳定,可以用于仙鹤草药材的真伪鉴别。 仙鹤草抗肿瘤研究应用流式细胞技术和电镜技术,在体外分别研究了仙鹤草水提取液对胃癌BGC-803和宫痉癌Hela细胞的生长抑制作用和细胞周期的影响,同时 黑龙江中医药大学博士学位论文 检测对免疫活性因子TGF一p和工L一12表达的影响,阐明 其对人癌‘细胞生长抑制的药理机制。实验结果表明,电 镜和光镜结果都支持仙鹤草水提液在体外能够抑制胃癌 BGC一803和宫颈癌Hela细胞株的生长,药物作用前后细 胞形态和超微结构发生明显变化,出现大量坏死细胞, 并能少量捕捉到凋亡细胞。在一定范围内,仙鹤草水提 液随着浓度的增加,对肿瘤细胞的抑制率迅速增加,在 药物浓度为IOOug/ml时,对胃癌BGC一803和宫颈癌Hela 细胞的抑制率分别为61.9%、67.9%。流式细胞结果显示, 仙鹤草水提液可干扰肿瘤细胞周期进程,阻滞肿瘤细胞 由G汁G、,期和GZ+M期转化,属一于细胞周期特异性抗肿瘤 药物。EL工SA检测结果显示仙鹤草水提液对人免疫活性 因子工L一12和TGF一p分别有调高表达和调低表达作用, 在体内可促进免疫细胞的识别和攻击,推测其可能是仙 鹤草抗肿瘤的药理机制之一。
【学位授予单位】:黑龙江中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R282.71

【引证文献】
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