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《天津医科大学》 2009年
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酶法辅助提取黄连生物碱的研究

宁娜  
【摘要】:目的: 优选黄连生物碱(包括:药根碱、巴马汀和小檗碱)的提取、纯化工艺,并初探其对α-淀粉酶的影响。方法: 1.通过反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)建立黄连及金芪降糖片中生物碱含量测定的方法。 2.平行比较超声法、回流法、冷浸法对黄连生物碱提取得率的影响来确定黄连生物碱的常规提取工艺。 3.通过单因素及正交试验确定冷浸法提取黄连生物碱的最佳工艺条件。 4.采用次碘酸钠滴定法测定果胶酶活力。 5.采用纤维素酶和果胶酶辅助提取黄连生物碱,对加酶组及未加酶组进行比较。通过单因素及正交试验确定纤维素酶辅助提取黄连生物碱的最佳工艺条件。 6.采用酸沉法纯化黄连生物碱,主要考察酸度、氯化钠用量、静置时间及粗品干燥温度四个因素对纯化黄连生物碱的影响。 7.研究黄连生物碱对α-淀粉酶的影响。 结果: 1.测定黄连及金芪降糖片中生物碱含量的色谱条件为:色谱柱为Diamondsil C18(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.1mol·Lˇ1磷酸二氢钾(30:70)为流动相,检测波长为345nm,流速为1.0mL·min-1。 2.平行比较不同常规提取工艺的研究表明:三种提取工艺中,以冷浸法的黄连生物碱提取得率最高。在上述三种提取工艺中均采用了纯水、酸水(含0.5%硫酸)、50%乙醇及酸性醇(50%乙醇中含0.5%硫酸)四种提取溶剂,平行实验结果表明0.5%酸水的生物碱提取得率最高。 3.通过单因素及正交试验确定冷浸法提取黄连生物碱的最佳工艺条件为:8倍量的0.25%酸水,黄连粒度范围为5~7mm,提取2次,每次24h。 4.采用次碘酸钠滴定法测定果胶酶活力,测定结果为10171U/g。 5.采用纤维素酶和果胶酶辅助提取黄连生物碱,对加酶组及未加酶组进行比较,结果表明加酶组中纤维素酶与果胶酶均能提高黄连生物碱的提取得率,其中以纤维素酶的生物碱提取得率最高。通过单因素及正交试验确定纤维素酶辅助提取黄连生物碱的最佳条件为:酶解液pH值4.0,酶用量为9mg·g-1,酶解时间2.5h,酶解温度35℃。 6.通过实验结果确定黄连生物碱的最佳纯化条件为:以盐酸调黄连提取液pH1-2,加入10%氯化钠(重量按溶液体积百分比计算),静置时间为12-24h,粗品干燥温度为60℃。 7.经研究发现,黄连生物碱对α-淀粉酶具一定的抑制作用,抑制率可达33.06%。 结论: 本研究所建立的黄连生物碱含量测定方法简单、准确,能够用于黄连及金芪降糖片中生物碱的质量控制。在优选的黄连生物碱酶法辅助提取工艺及纯化条件下,生物碱提取得率较高,并具有较好的重现性。研究表明黄连生物碱能够抑制a-淀粉酶,可能与黄连生物碱改变α-淀粉酶的空间结构有关,这一实验结果为黄连的进一步药理实验提供研究依据。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:TQ461

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